高效液相色譜儀分析中，選擇流動相時應考慮流動相與填料的作用、純度、與檢測器的匹配、粘度、對樣品的溶解度和樣品回收等方面。

一、流動相與填料的作用：

        流動相應不改變填料的任何性質。

        低交聯度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時遇到某些有機相會溶脹或收縮，從而改變色譜柱填床的性質。

        堿性流動相不能用于硅膠柱系統。

        酸性流動相不能用于氧化鋁和氧化鎂等吸附劑的柱系統。

二、純度：

        色譜柱的壽命與大量流動相通過有關，特別是當溶劑所含雜質在柱上積累時。

三、與檢測器的匹配：

        當使用UVD時，所用流動相在檢測波長下應沒有吸收或吸收很小。

        當使用RID時，應選擇折光系數與樣品差別較大的溶劑作流動相，以提高靈敏度。

四、粘度：

        高粘度溶劑會影響溶質的擴散和傳質，使柱效降低，還會使柱壓增加，分離時間延長。最好選擇沸點在100℃以下的流動相。

五、對樣品的溶解度：

        如果溶解度欠佳，樣品會在色譜柱內沉淀，不但影響純化分離，而且會使色譜柱惡化。

六、樣品回收：

        應選用揮發性溶劑。