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DNA雙鏈斷裂方法的優勢

[2013/9/14]

  (1)能夠按照人們的意愿精確修飾/改造基因組;

  (2)實現基因敲入(knock-in)和條件性基因敲除(conditional gene knock-out);

  (3)精確制備模擬人類遺傳病的動物模型:很多人類的遺傳病是致病基因的錯義突(missense)造成的,用同源重組的方法可以在斑馬魚中造成相對應的基因突變形式,從而 在基因水平精確模擬人類疾病。

  此外,跟短片段單鏈寡聚核苷酸造成的重組修復(Steven Ekker的方法,只能進行小范圍修飾)相比,用傳統的長雙鏈DNA做同源重組打靶載體至少有以下優點:

  (1) 能夠進行大片段的基因修飾,比如將報告基因(如GFP)整合到內源基因中,或模擬基因較大片段缺失引發的人類遺傳病(這種病也有很多)等等;

  (2)容易檢測隨機插入(利用接頭介導的PCR或Southern雜交技術),這對于條件性基因敲除尤其重要。因為loxP或FRT這樣的短序列插入非特異的位點,有可能引發意想不到的后果,使實驗結果難以解釋;

  (3)由于可以進行大片段修飾,使人們有可能一次性插入兩個loxP位點,完成條件性基因敲除;短片段單鏈寡聚核苷酸的方法要分成兩步進行,需要兩次篩選,加上養殖時間,會耗費更多的精力、時間和空間。